Государственная фармакопея Республики Беларусь -
Скачать (прямая ссылка):
ддамлнщмфідошт Ю
.^іТП^ІІ^ЛріІ
Рисунок 2.4.20.-1 .Типичные хроматограммы антиоксидантов
(Методы А и С)
а — стартовая точка №1+пятно галлатов+пятно нордигидрогваяретовой кислоты b — стартовая точка №2 с — стартовая точка №3
1 — гваяковая смола
2 — 3-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол
3 — 2-(1,1 - Диметилэтил)-4-метоксифенол
4 — 2.2.5,7,8 - Пентаметил-6-хроманол
5 — тетраэтилтиурам дисульфид
6 — а-Токоферол
7 — дибутилгидроксианизол
8 — бутилгидроксианизол А — жёлтый
В — красный С — синий
Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис. 2.4.20.-1. Если на линии старта обнаруживаются синие пятна, проводят разделение и идентификацию полигидроксиантиоксидантов (метод В).
В. ПОЛИГИДРОКСИАНТИОКСИДАНТЫ
На линию старта хроматографической пластинки наносят 1 мкл, 2 мкл, 4 мкл и 6 мкл испытуемого раствора (а), а также от 1 мкл до 2 мкл окрашенного раствора, приготовленного, как указанно в методе А. Пластинку помещают в камеру со смесью растворителей: кислота уксусная ледяная Р-бензол Р-петролейный эфир Р (30:60:60). Когда фронт растворителей пройдёт около 13 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают на воздухе, опрыскивают раствором 200 г/л кислоты фосфорномолибденовой Р в этаноле Р и продолжают проявление по методике, описанной для идентификации неполигидроксиантиоксидантов.
Хроматограмму оценивают, сравнивая положение пятен на хроматограмме испытуемого раствора с Рис 2.4.20.-2.
Рисунок 2.4.20.-2. Типичные хроматограммы полигидроксиантиоксидантов (метод В)
1 — окрашенный раствор
2 — бутилированный гидроксианизол
3 — гваяковая смола
4 — нордигидрогваяретовая кислота
5 — метилгаллат
6 — этилгаллат
7 — пропилгаллат
8 — октилгаллат
9 — добецилгаллат А — жёлтый
В — красный С — синий
С. АНТИОКСИДАНТЫ, НЕИЗВЛЕКАЕМЫЕ МЕТАНОЛОМ
Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии на другой пластинке. Хроматографирование проводят по методике, описанной для неполигидроксиантиоксидантов, используя вместо испытуемого раствора (а) испытуемый раствор (b). Пластинку опрыскивают раствором 10 г/л дихлорхинонхлоримида Р в этаноле Р. Пятна проявляются в течение 15 мин. Хроматограмму оценивают, сравнивая с Рис. 2.4.20 - 1. Зоны, отмеченные пунктиром, соответствуют а-токоферолу и бутилированному гидрокситолуолу. Пятна в- и Y-токоферола находятся в зоне, соответствующей 2-(1,1-диметилэтил)-4-метоксифенолу.
Если в испытуемом веществе в существенном количестве присутствует бутилированный гидрокситолуол, его определяют по методу А.
2.4.21. ПОСТОРОННИЕ МАСЛА В ЖИРНЫХ МАСЛАХ МЕТОДОМ ТОНКОСЛОЙНОЙ ХРОМАТОГРАФИИ
Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии (2.2.27) с использованием в качестве тонкого слоя кизельгура G Р. Пластинку
пропитывают, поместив в камеру, содержащую смесь вазелинового масла Р и петролейного эфира Р (10:90) в таком количестве, чтобы нижний край пластинки погрузился на 5 мм ниже поверхности жидкости. Когда смесь для пропитывания поднимется не менее чем на 12 см от нижнего края пластинки, ее вынимают из камеры и дают растворителю испариться в течение 5 мин. Последующее хроматографирование проводят в том же направлении, что и пропитывание.
Приготовление смеси жирных кислот. К 2 г масла прибавляют 30 мл 0,5 М раствора калия гидроксида спиртового и нагревают с обратным холодильником в течение 45 мин. Прибавляют 50 мл воды Р, оставляют до охлаждения, переносят в делительную воронку и встряхивают с тремя порциями эфира Р, по 50 мл каждая. Эфирные слои отделяют, водный слой подкисляют кислотой хлористоводородной Р и вновь встряхивают с тремя порциями эфира Р, по 50 мл каждая. Все эфирные слои объединяют и встряхивают с тремя порциями воды Р, по 10 мл каждая, отбрасывая промывные воды. Объединенные эфирные слои высушивают над натрия сульфатом безводным Р и фильтруют. Затем эфир выпаривают на водяной бане, а из остатка готовят испытуемый раствор или раствор сравнения. Жирные кислоты также можно извлечь из раствора, полученного в ходе определения неомыляемых веществ.
Испытуемый раствор. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из испытуемого масла, растворяют в 4 мл хлороформа Р.
Раствор сравнения. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из смеси 19 объемов кукурузного масла Р и 1 объема рапсового масла Р, растворяют в 4 мл хлороформа Р.
На линию старта хроматографической пластинки наносят по 3 мкл каждого раствора. Помещают пластинку в камеру со смесью растворителей: вода Р -кислота уксусная ледяная Р (10:90). Когда фронт растворителей пройдет 8 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, высушивают при температуре 110°С в течение 10 мин и оставляют до охлаждения. Затем, если нет других указаний в частной статье, пластинку помещают в закрытую плотно подогнанной крышкой хроматографическую камеру, предварительно насыщенную парами йода (на дно камеры в выпарительной чашке помещен йод Р). Через некоторое время проявляются коричневые или желтовато-коричневые пятна. Пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут. Когда коричневый фон исчезнет, пластинку опрыскивают раствором крахмала Р. Появляющиеся синие пятна могут приобретать коричневую окраску при высушивании и вновь становятся синими после опрыскивания водой Р.
